PCR-putken varotoimet

aapinen

Pohjamaalit ovat avain PCR-reaktion onnistumiseen tai epäonnistumiseen. Vahvistuksen tarkkuuden ja tehokkuuden varmistamiseksi pohjamaalien suunnittelussa on noudatettava seuraavia periaatteita:

Sama geenisekvenssi eri alueilla voidaan saada etsimällä samaa geenisarjaa eri lajeissa NCBI-ohjelmiston kautta

Pohjamaalin pituus: 15-28bp, pidempi kuin 38bp, lisää hehkutuslämpötilaa, joka ei edistä yleisen Taq-entsyymin vahvistumista

Alukkeiden GC-pitoisuus on 40% - 60%, ja TM-arvo on parhaiten lähellä 72 °C: ta

Kodonin rappeutumisen vuoksi pohjamaalin 3 pään tulisi välttää kodonin kolmas asento (mieluiten T)

Emäsjakauma on hajallaan, ja enintään 3 peräkkäistä g tai C:tä 3 'end

Pohjamaali itsessään ei saa muodostaa hiusneularakennetta. Kun pohjamaalin suunnittelu on valmis, se on tarkistettava räjäyttämällä